冬春交替，是甲型流感病毒（以下简称甲流）等呼吸道病原体感染的高发季节，面对症状相似的呼吸道病原体感染，病原体的实验室检测无疑是鉴别诊断的金标准。然而，当你真正收到一份甲流阴性的报告时，是否就可以对甲流放下警惕，高枕无忧了呢？答案是：不能！本文从甲流检测方法入手，着重分析甲流实验室检测过程中可能出现的假阴性结果（即病人感染了甲流，但是实验室检验结果是阴性），提醒公众在面对甲流时应持续保持警觉，同时也给读者提供一份实用的科普。

目前甲流的实验室检测有以下方法：

1.快速抗原检测

原理：采用胶体金免疫层析法，通过双抗体夹心法定性检测鼻咽拭子样本中的甲型流感病毒抗原。

优点：操作简便、结果快速（通常30分钟内），适合初步筛查和急诊使用。

缺点：受抗原类检测试剂方法学的限制，其分析敏感性普遍较核酸类试剂低，病毒抗原阳性支持诊断，但检测阴性不能排除甲流感染。

导致假阴性结果有可能的原因包括：（1）样本采集、储存不当，样本不新鲜或者反复冻融。（2）样本中病毒滴度过低。（3）病毒基因变异导致抗原决定簇改变。（4）样本中存在高浓度的药物如鼻腔喷雾剂干扰结果。（5）其他：试剂拆封后久置于空气中容易受潮，导致试剂变质；操作过程中裂解液加入过量，可能导致样本稀释；判读时间过短，样本反应不充分；判读时间过长，试剂干燥导致的检测结果误差等主观原因影响产生的假阴性。因此同一患者建议分次，多部位采集样本可能避免假阴性，同时，建议对有疑问的阴性结果采用灵敏度更高的核酸检测方法进行复核。

2.病毒核酸检测（PCR法）

原理：通过反转录实时荧光定量PCR法检测鼻咽拭子中的甲型/乙型流感病毒核酸（RNA）。

优点：相比快速抗原检测，PCR技术是通过扩增病毒的遗传物质，具有更高的敏感性和特异性，能定量，还能对流感病毒进行分型，能够检测到病毒载量较低的早期感染。

缺点：检测成本高，操作复杂，需要专业设备和技术人员，结果解读时间较长。

可能导致假阴性检测结果的原因：（1）样本采集和处理不当，即采集的鼻咽拭子样本不包含足够的病毒颗粒，或者样本在处理过程中遭受污染或降解，都可能导致PCR法未能检出病毒核酸，产生假阴性结果。因此，样本建议采集鼻咽拭子，比咽拭子具有更高的准确性，同时样本采集后及时送检，不能及时送检的样本按规范要求保存。（2）病程早期或病毒复制高峰后期，病毒载量可能非常低，低于PCR检测的灵敏度阈值，产生的假阴性。一般情况下，甲流症状出现后，鼻咽部的病毒量在24-96小时达到峰值，这段时间采集样本送检具有更高的敏感性。（3）病毒待测靶序列的变异或者其他原因导致的序列改变，引起的假阴性。（4）未经验证的其他干扰因素（如甲流病毒核酸在体内持续时间受合并各种基础病影响）或者PCR抑制物导致的假阴性。总之，没有规范标准的临床实验室管理和操作，或者对诊断试剂盒质控管理不足，都不能保证核酸检测结果的准确可靠。

3.抗体检测

原理：通过胶体金法或者间接免疫荧光法检测血清中特异性抗体lgM的存在和水平来确认感染。

优点：胶体金法操作简便，间接免疫荧光法灵敏度相对胶体金法高。

缺点：有窗口期：即病毒感染后的2至4天内，体内特异性抗体的水平还未产生或者低于检测浓度，在此期间，即使个体已经感染病毒，血清抗体检测也可能呈阴性。此外，lgM类抗体虽然是机体受到病原体感染后，最早产生的，但lgM类抗体半衰期较短，仅为5天，若血清中检测出特异性lgM类抗体含量增高，表明近期有感染，该方法仅适用于甲流的辅助诊断。

综上所述，甲流假阴性结果，除了实验室检测方法本身的局限性，还受到采样、操作等多方面因素影响，即甲流检测结果阴性，并不能排除甲流感染。当然，甲流诊断也不能单凭检验报告单，还需要结合临床诊断。